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　　研究内容 1 )研究 VEGI 是否对骨髓造血干细胞 (HSC) 和内皮前体细胞(EPC)的形成有直 接的抑制作用。 2)建立体内和体外测量血管形成的实 验模型。 3)利用成骨细胞特异表达 ATF4 的转基 因小鼠 (OCN-ATF4-tg), 比较乳腺癌细胞 在正常和 OCN-ATF4-tg 小鼠中诱导血管形 成的能力。 4)比较乳腺癌细胞在正常和 ATF4 基因 敲除小鼠中诱导血管形成的能力。 5)利用体外血管形成模型,研究成骨细 胞中 ATF4 水平对乳腺癌细胞诱导血管形 成能力的影响。 6 )检测乳腺癌细胞及组织是否表达 MCP-1 及其受体 CCR2,以及 PTHrP、雌激 素等对 MCP-1 和 CCR2 表达的调节作用。 7)检测 MCP-1 及 CCR2 在正常乳腺上皮 细胞中的表达， 应用免疫组化技术检测含 有正常的乳腺组织、乳腺增生组织、原位 乳腺癌、 乳腺癌转移组织—特别是骨转移 —的组织芯片中 CCR2 的表达。 8)观察 IL-6、TNFα 、PTHrP 是否能够 诱导 MCP-1 和 CCR2 的表达， 研究当 MCP-1 与破骨细胞、 成骨细胞或乳腺癌细胞表面 的 CCR2 结合后的信号传导途径。 9 )选择乳腺癌细胞系— MDA-MB-231 、 MCF-7、 T47D、 及 EMT6, 分别用 EPA or DHA 作用，同时用 AA (Ω -6)作为对照，观察 细胞的生长和凋亡。 10)收集上述细胞的裂解液，通过免疫 印记实验(Western blot) ,检测 EGFR 和 p38MAPK 的磷酸化和 src激酶的表达。 11)分离脂筏，Flotillin 和糖基化磷 脂酰肌醇结合(anchored)蛋白将备用为 脂筏的检测标记。 同时用免疫印记技术检 测磷酸化及非磷酸化的 EGFR 和 p38MAPK 的表达 12)细胞凋亡特异性标志物的检测。 13)其他与Ω -3 PUFA 相关的蛋白因子

　　1)阐明 VEGI 参与控制 EPC 分化的分子 机理。预期实验结果：认证受体蛋白质分 子和信号传递途径中的主要蛋白质分子。 2)建立成骨细胞中 ATF4 在乳腺癌细胞 诱导血管形成中的可能作用及其分子机 制。 3)完成研究内容中提到的 MCP-1 及其 相应受体 CCR2 在正常的乳腺上皮细胞、 不同恶性度的乳腺癌细胞、 正常的乳腺组 织、增生组织、乳腺肿瘤以及转移部位组 织中的表达、调节及作用机制。 4)证明：a) EPA 和 DHA 将能够明显的 抑制乳腺癌细胞的生长， 而 AA 没有作用； b) EPA 和 DHA 将能够改变脂筏的脂质结 构， 从而引起乳腺癌细胞凋亡；c) EPA 和 DHA 将能够改变乳腺癌细胞中 cox2、 PGE2 和β -catenin 的表达。